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常用促孢培养基

马铃薯晚疫病菌培养基

葡萄糖:20克 苹果酸(用NaOH中和):2克 (NH4)2SO4:2克 KH2PO4:0.67克 MgSO4·7H2O:0.5克 K2HPO4:0.33克 CaCL2:1克 蒸馏水:1000ml 1%FeCL3:10滴 盐酸硫胺素:1ml HV培养基

PDA

马铃薯200克、蔗糖(葡萄糖)20克、自来水100克、琼脂18克、

燕麦片琼脂培养基:

燕麦片30克、琼脂17克、水1000克、燕麦片加水煮1小时,过滤。

水生4号培养液

硫酸铵0.200克 过磷酸钙0.030克 硫酸镁0.080克 碳酸氢钠0.100克 氯化钾0.025克 蒸馏水1000毫升 氯化铁(1%)0.450毫升 soil extract0.500毫升

土壤浸出液用园田土,水:土为2:1,搅匀沉清后取上清液,如果培养液使用量较大,上述药品可分别先配制成贮备液,然后按所需量稀释而成,但要注意每加一种贮备液时应摇匀后再加下一个贮备液。

Gause′s Synthetic Agar (高氏合成一号琼脂)

KNO3 1g Soluble starch(可溶性淀粉) 20g

K2HPO4 0.5g MgSO4.7H2O 0.5g

NaCl 0.5g FeSO4 0.01g

Agar (琼脂) 20g water (水) 1000ml

pH 7.2-7.4

适用范围:刺孢小单孢菌绛红变种、紫色小单孢菌(绛红小单孢菌)、白黄链霉菌、白色链霉菌、抗生链霉菌、双重轮丝链霉菌、产色链霉菌、烬灰链霉菌、天蓝色链霉菌、灭蚊链霉菌、红霉素链霉菌、青色链霉菌、球孢链霉菌、浅灰链霉菌、灰色链霉菌、吸水链霉菌、淡紫灰链霉菌、黄色长孢链霉菌、藤黄色链霉菌、细黄链霉菌、黑化链霉菌、玫瑰色链霉菌、华美链霉菌、嗜热链霉菌、委内瑞拉链霉菌、紫色直丝链霉菌、紫色链霉菌、绿色链霉菌

疫霉菌常用培养基

1、胡萝卜培养基

将200g新鲜胡萝卜切成小片,加去离子水500ml,用组织捣碎机捣碎约40秒,用4层纱布过滤去渣,实践水至1000ml,加入琼脂20g,在121℃下高压蒸汽灭菌15-20分钟。(适用于多种疫霉菌的分离、培养和诱导产生卵孢子。

2、燕麦培养基

燕麦片30g,水1000ml,在60℃下水浴1小时,双层纱布过滤去渣。上清液补足水至1000ml,加入琼脂20g,煮沸待琼脂熔化后健壮。121℃下高压蒸汽灭菌15-20分钟。(适用于多种疫霉菌的分离、培养和诱导产生卵孢子)

3、玉米粉培养基

玉米粉300g,水1000ml ,琼脂20g。(配制方法及用途与燕麦培养基相同)

4、番茄培养基

番茄汁20ml, CaCO3 0.4g,琼脂2g,去离子水80ml

番茄汁的制备方法:取新鲜成熟番茄果实,用自来水洗净后切成片,置于组织捣碎机中匀浆2分钟,经双层纱布过滤去种子和组织残余,滤过液即为所制备的番茄汁(培养基在121℃下高压蒸汽灭菌20分钟。适用于多种疫霉菌的培养和产孢)

5、大豆培养基

大豆汁10ml,琼脂2g,去离子水90ml。

大豆汁的制备方法是,60g干大豆种子用水洗净,浸泡过夜,浸泡过的大豆与330ml去离子水混合,用组织捣碎机破碎2分钟,经单层纱布过滤去渣。滤过液即为所制备的大豆汁(培养基在121下高压蒸汽灭菌20分钟。适用于多种疫霉菌的分离、培养和产孢)

6、黑麦培养基

黑麦50g,琼脂20g,去离子水1000ml

取黑麦种子50g在1000ml去离子水中浸泡24-36小时,在121℃下高压蒸汽灭菌30分钟,经4层纱布过滤去渣。上清液补足水至1000ml,加入琼脂20g,在121下高压蒸汽灭菌。(黑麦培养基特别适于马铃薯晚疫病菌(P.infesans)的分离、培养与产孢。

稻瘟菌培养基

1、 高粱或燕麦种子100g,水230ml,浸2h,灭菌

2、 稻米培养基:

白米(粉)2g,琼脂1g,水100ml

3、 酵母淀粉培养基:

可溶性淀粉 1-2%,粉状酵母浸渍物0.1%-0.3%,琼脂1.5%,

培养基制备(按1000ml计)

1、 营养肉汤(Nutrient broth)培养基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,加水至1000ml,pH7.2~7.4

2、 营养琼脂培养基(Nutrient agar)培养基: 牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂15~20g,加水至1000ml,pH7.2~7.4

3、 肉汁葡萄糖培养基: 牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,,pH7.2~7.4

4、 察氏培养基:NaNO32g,K2HPO4 1g,KCl 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,蔗糖30g, 琼脂15~20g,加水至1000ml,pH自然

5、 高氏一号培养基:可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl 0.5g, K2HPO4 0.5g, MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g, 琼脂20g,加水至1000ml,pH7.2~7.4。此培养基适用于多数放线菌,孢子生长良好,宜保藏菌种。制法:先用少量冷水将淀粉调成糊状,再取700ml水盛于烧杯中,在电炉上加热,沸腾时边搅拌边将淀粉糊倒入,待透明后再将其他成分加入,最后补足水分至1000ml.

6、 无碳基础培养基(NH4)2SO4 5g,KH2PO4 1g,NaCl 0.1g, MgSO4·7H2O 0.5g,CaCl2 0.1g,酵母膏0.2g, 加蒸馏水至

1000ml,pH6.5.加2%水洗琼脂即成固体培养基.于6.86×104Pa压力下灭菌20min.此培养基适用于测定酵母菌对碳源的利用(加待测碳源2%).

7、 无氮基础培养基:葡萄糖20g, K2HPO4 1g, MgSO4·7H2O 0.5g,

酵母膏 0.1g或20%豆芽汁20ml,水洗琼脂20g,加无氨蒸馏水至1000ml.pH6.5. 于6.86×104Pa压力下灭菌20min.此培养基适用于测定酵母菌对氮源的利用(加待测氮源0.5%).

8、 营养缺陷型筛选用培养基

⑴ 普通营养肉汤培养基

⑵ 加倍营养肉汤培养基: 牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,加水至500ml,pH7.2

⑶ Vogel 50×(即浓缩50倍): MgSO4·7H2O 10g,柠檬酸

100g,NaNH4HPO4·4H2O175g,KH2PO4·2H2O599.88g,K2HPO4·3H2O656.31g,加蒸馏水至1000ml.配置时先加水500ml,加热使药品溶解后,再定容1000ml.配好后放入冰箱备用.

⑷ 固体基本培养基: Vogel 50×20ml,葡萄糖20g,水洗琼脂20g,加蒸馏水至1000ml,pH7.0,

⑸ 2氮液体基本培养基:K2HPO4 7g,KH2PO4 3g,柠檬酸纳·3H2O 5g,MgSO4·7H2O 0.1g,(NH4)2SO4 2g,葡萄糖20g,加蒸馏水至1000ml,pH7.0, 于4.9×104Pa压力下灭菌20~30min.

⑹ 无氮液体基本培养基:在⑸的配方中除去(NH4)2SO4即可. ⑺ 混合氨基酸和混合维生素的配置:将氨基酸分为七组(如下表),其中六组各有6种氨基酸,每种氨基酸等量研细,充分混匀.若所选的氨基酸为DL型,则用量加倍.第七组只有一中氨基酸.第八组为混合维生素.

Ⅰ 赖氨酸 精氨酸 甲硫氨酸 半胱氨酸 胱氨酸 嘌呤

Ⅱ 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 谷氨酸 天冬氨酸 嘧啶

Ⅲ 丙氨酸 甲硫氨酸 苏氨酸 羟脯氨酸 甘氨酸 丝氨酸 Ⅳ 亮氨酸 半胱氨酸 谷氨酸 羟脯氨酸 异亮氨酸 缬氨酸 Ⅴ 苯丙氨酸 胱氨酸 天冬氨酸 甘氨酸 异亮氨酸

Ⅵ 色氨酸 嘌呤 嘧啶 丝氨酸 缬氨酸 酪氨酸

Ⅶ 脯氨酸

Ⅷ 维生素B1 维生素B2 维生素B6 泛酸 对氨基苯甲酸 烟碱酸及生物素

因脯氨酸容易潮解,所以单独列为第七组.

把维生素B1、B2、B6、泛酸、对氨基苯甲酸(BAPA)、烟碱酸及生物素等量研细,充分混匀,配成混合维生素为第八组。