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１Ｏ ６
实验动物与 比较 医学 Ｌ ｂ ｒ ｏｙ ｉ ｌｎ ｏ ａａｖ ￣ｃ ａ ｏａ ｒ Ａｎｍａ ａｄＣ ｍｐｒｔ ｅＭｅ ｍｅ ｔ ｉ
Ｊｎ２ ０，８３ ｕ ． ８２（） ０
四种小型猪 内源性逆转录病 毒基 因研 究
李 金 泽， 岳 敏， 张建 明， 玉珏 ， 为 望 王 顾 （ 南方 医科 大学 实验 动物 中心 暨 比较 医学研 究所 ， 州 ５ ０ １） 广 １５ ５
［ 摘要１ 目的 检测四种小型猪在 内源性逆转 录病毒基 因（Ｅ Ｖ 拷 贝数上的差异 ， 图找 出不含 ＰＲ ） 试
或含 有 较 低 拷 贝数 的 个体 或 品种 。方 法 采 用 半 定量 Ｐ Ｒ方 法检 测 了我 国四种 小 型猪 内源性 逆 Ｃ
转 录病毒基 因的拷 贝数 。 结果
贵州小型猪 、 五指 山猪 、 西藏小型猪 、巴马小型猪 的Ｐ Ｒ Ｅ Ｖ的拷
贝数 分 另 是 ３ ． ｌ ４１ ｊ ２士 １ ６ ９ ８± １ ． ，２ ．１士 １ ．１ ７１ ６９ ，２ ． ３ ３８ ３ ８ ７ ４１， ． ２ ２士 １ ． （ｒ ．１ ， ＝ ． ９ ，Ｅ ｖ ４４ １ ０６ ４ Ｐ ０ ０ ） ｎ Ａ ３ ＿ ６
的拷 贝数 分 别是 ９７ ． ８士５ ８ ００ ． ，１ ． ４ ６± ５ ４ ０ ３±５７ ，１．１士 ６ ３ ００ ４ Ｐ ０ ８ ） ｎ Ｂ ． ，１ ． ３ ２ ．１ ０５ ． （ ． ， ＝ ． ８，Ｅ ｖ ２ ４ ９
的拷 贝数 分 别 是 ２ ．４± ｌ ． ，２ ．２士 ８ ６ ３ ４１ １６ Ｏ ２ ７ ． ，１ ，５± ８５ ， １ ．０士 ８ ５ １５ ２ Ｐ ０２ １。 ３ ８ ．０ ７６ ． （ ．１ ， ＝ ． ） ６ ２
尚不 能认 为 四 个猪 种 间 Ｐ Ｒ Ｅ Ｖ、Ｅ ｖ ｎ Ａ、Ｅ ｖ ｎ Ｂ的拷 贝数 之 间 的差 异 具 有 统 计 学意 义 。结论 四种
常用的小型猪 内源病毒 负载量较低 ， 表明其用于异种 器官移植研 究的可行性 。
［ 关键词 Ｊ型猪 内源性逆转 录病毒 贝数 、 猪 拷 半定量Ｐ Ｒ Ｃ
［ 中图 分类 号］ ３ ２ Ｒ一３ Ｑ９ — ３ ［ 献标 识码］ ［ 耄编 号 ］ ０ ４８ ４ （０ ８０ — １００ ５３ 文 Ａ 文 １ ０ －４ ８２ ０ ）３ ０ ６ —４
实验 用 小 型猪 在 医 学 、生命 科 学 研 究 领 域 有 着 广泛 的用 途 。西藏 小型 猪 是一种 可 以培 育 成 医学
体或 一个 品种， 由此培 育 出一个 没 有 内源 病毒 威胁 、
适用 于异种 器官 移植 的品种或 品系矬 一步挖 掘我 国
地 方 品种 的资 源 优 势 ， 福 子 人 类 和 社 会 。 造
实验动物 的优 秀 资源， 其体 形 小， 重 缓慢等 特 点都 增 是培育 成 实验 用 小型猪 得 天独 厚 的优 势 。猪 和人 在 解 剖学 、生 理 学 方 面 极
其 相 似 ，所 以常 在 心 血 管 系 统 、 消 化 系 统 、 生 殖 系 统 、 内分 泌 系 统 、营
养 学 、 皮 肤 、牙 科 、 眼 科 等 研 究 中用 作 实 验 动
１ 材 料 和 方 法
１１ 实 验动 物 ．
本研 究 所考 查 的西藏 小型 猪群 体为 南方 医科 大
物 。近 年来异 种 组织器 官 移植 已受到 医学 界 广泛重
视 ，猪 作 为 组 织 器 官供 体 显 示 出的 美 好 前 景 。
学 实验动 物 中心 于 ２ ０ 从 西 藏 高原 山区 引入 ５ ０４年 Ｏ 头原种 西藏 小 型猪 到广 州 地 区后 自繁 自养 形成 的种 群 。 随机 取 １ 为 研 究对 象 。另 有 巴马 小 型猪 ， ５头 贵 州 小 型猪 ， 五指 山猪 ＤＮＡ 样 本 各 １ ５份 ， 由 中 国农 业 科 学 院 畜牧 兽 医研 究所 李奎 教 授 惠 赠 。
１ 主要 仪 器 设备 与试 剂 ． ２
中 国地 方 猪 种 在 地 域分 布 、进 化 程 度 等 方 面 存 在 着 较大 的差 异 ，具 有 良好 的 遗 传 多样 性， 易 容 找到 没有或低 拷 贝内源 病毒序 列 的品种 或 个体， 因此
本项 研 究主要 利用 半定 量 Ｐ Ｒ的方 法检 测 中国 的主 Ｃ 要几种 小 型猪 在猪 内源 性逆 转录 病 毒（Ｅ Ｖ 拷 贝数 ＰＲ ）
上 的差异， 图找 出不 含或 含有 较低 拷 贝数 的一个 个 试
【 收稿 日期】 ０ ８０ ．０ ２ ０ —４１
【 基金项 目】 广东省科研条件建 设项 ￣（０ ６ ６ １ １５ ）广 ２ ０ Ｂ ０ ０ ０ ９； 东省农业 攻关计￣ （０６ ２ ２ ｌ５ ） Ｊ ０ Ｂ ０ ０ ｏ ３ ２
普通 Ｐ Ｒ仪 Ｂｉｅ ｙ ｌ （ 国博 日公司、 Ｃ ｏｒ ＸＰ Ｃ ｃ ｒ中 ｅ ，
凝 胶成 像 仪（ Ｏ—ｉ ，ＵＶ １０ 紫 外分 光光 度计 ＢＩ Ｒ Ｄ） 一７ ０
（ ＨＩ ＡＤＺ ， 血 液 基 因 组 ＤＮＡ 提 取 试 剂 盒 Ｓ Ｍ Ｕ）
（ Ｉ ＮＧ Ｎ公司） ｅ ｅｔｈ ｔ ａ Ｃ ＴＡ Ｅ ，Ｐ ｒ ｃＳ ｏ Ｔ ｑＰ Ｒ试剂盒 ｆ Ｍ
（ ａ Ｒａ公 司） Ｔ Ｋａ 。 １ 方 法 ． ３
【 作者简介１ 李金泽（９ ３） 男， １８ 一 ， 在读 硕士， 主要从 事实验 动物
学研 究 。 【 通讯作者】 为望（９ ６）男， 顾 １５ ・ ， 教授， 博士生导师，
１ ． 血 液 采 集 西 藏 小型 猪 在清 醒状 态 下， ．１ ３ 保定，
采 前腔 静 脉 血 ５ｍｌ ＤＴ ，Ｅ Ａ抗 凝 。于 － ０Ｃ ７ 。低温 冰 箱 保 存 。其 它猪 ＤＮＡ 样本 由李 奎 教 授 惠 赠 。
Ｅｍａ：ｕ ｗ１０ １３ ｏ － ｉ ｇｗ ０＠ ６ ｍ ｌ ｏ
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2 0 0 8 2 8 (3 )
．
实验 动 物 与 比 较 医 学
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pa r a tiv
e
M
e
d ic i n
e
16 l
1 3 2
． ．
血 液 全 基 因组 D N A
DNA
提取
用 T IA N GE N 公司
p G
e n o m
0 1 5 6 2 5 和 0 0 7 8 12 5
． ．
n
g／l 4 g
个梯 度 测 定 P E R V p 和 膜
：9
产血 液基 因组
提 取 试 剂 盒 (T I A N a m
ic
蛋白
1 3 5
． ．
B
。
D N A K i t )提 取 西 藏 小 型 猪 血
，
液全基 因组 D N A
，
。
全基
PCR
s
一
反 应 条件 ：
50 ℃30
s
一
PER Vp 72 ℃ 30
s
4 C
。
变 性 10
25
。
m
in
；
因 组 D N A 用 T E 溶 液溶解 稀 释 10 倍 紫外 分 光 光
94 ℃ 30
，
循环
in
；
次 ：7 2 ℃
C30
5
m
度 计 测 定 O D 280 将
．
Ⅲn
和0
D
2 6 0 。。
。
根据测 定 的 0
一
D
260
。。
值
。
延 伸 5 m in
62 ℃ 30
E
n v s
一
；
E
n v
A
：9
s
4 口 C
，
变性
25
10
m
94
s
一
DNA
．
浓度调 整到
10
n
g／l g
。
2 0 ℃ 低温
冰箱保存
72 ℃ 30
循环
in
；
次；
72℃
S
一
延伸
in
s
一
；
1 3 3
PCR
引物 设 计
根据
，
PERV
基 因 的聚合 酶 区
Vp
B
：9
4 ℃
s
，
变性
10
m
94 ℃ 30
56 ℃ 30
；对 照
：
段 (P E R V p ) 设 计 了特 征 引 物 使 P E R
PE R V
的拷 贝数 代 表
72 ℃ 30
循 环 2 5 次 ；7 2 ℃ 延 伸 5 m i n
in
；
94 ℃
s
，
基 因 的拷 贝数
：5
'
-
。
变性
10
m
94 ℃30
s
一
56 ℃ 30
m
s
一
72 ℃ 30
PE R V p：
循环
GCTA CA ACCA TTA GGA A A A CT AA A A G 3
—
25
次；
7 2 ℃
延伸 5
in
。
正向
’
．
：
1 3 6
． ．
基 因拷 贝 数 的 计 算 利 用
，
S c io
n
Im
a
g
e
软件估
CE L
反 向：5 A A C C A G G A C T G T A T A T C T T G A T C A G 3
'
一
’
：
测 扩 增 片 段 的 灰 度 值 假 定 G C A T 含 量 相 等 的前 提 下
膜 蛋 白 A (E
’
一
n v
A)
：
’
5 正 向： T G G A A A G A T T G G C A A C A G C G 3
一
将其矫正 到
30 0 bp
的 灰度 值
。
利用微软 的 E X
，
： ：
5 反 向：
’
一
A GTGATGTTA GGCTCA GTGG 3
．
’
软 件 计 算 系 列 稀 释 后 的直 线 斜 率 各 基 因 的斜 率 与 相 对 应 单 拷 贝基 因 斜 率 的 比 值 既 为 该 基 因 的拷 贝数
。
膜 蛋 白 B (E n v
’
一
B )
：
’
．
5 正 向： T T C T C C T T T G T C A A T T C C G G 3
：
’
1 -3 7
．
统 计 学处 理
．
结 果 以 夏 ±s 表 示 所 有 数 据 用
，
5 反 向：
’
一
TA CTTTA TCG GG TCCCA CT G 3
一
：
SPSS l 3 0
统 计 软 件 处 理 并 用 单 因 素方 差 分 析 进 行 组
，
单 拷 贝 基 因 对 照 (猪
'
-
s e x o n
l
仪) ：
’
一
间 比较
：
。 ’
一
，
P
0 0 5
．
为差异有统计学意义
。
正 向： 5 T C G G A G G A G G A A A G A G G G A G 3
反 向： 5 G G
'
-
GA GGA GA A CTG CTGTA G G 3
2
bp
、
结果
．
PE R V p E
n v
扩 增 片段 长 度 为 3 2 6
、
bp
。
、
En
v
A
为 359
B
为
263 bp
对照为
388 b
p
2 1
西 藏小型猪 P E R V 基 因 P C R 结果
1 _3 4
．
DNA
的 系列 稀 释 将 每 个
和 1 25
．
DNA
，
样 品稀 释 成
0 3 12 5
．
在 进 行大规模 半 定 量
了准 确 测 定 同
PCR
，
检 测 之 前 测 定 了规
，
10
、
5
、
2 5
．
n
g／ l 4 g
一
个梯度 用 于 测 定 单拷
0 625
．
模 化 测 定 时 的 P C R 反 应 条件 对 模 板
一
DNA
浓 度进 行
贝对 照 和 膜 蛋 白 A
；进
步稀 释 成
，
，
。
个个体 的 4 种基 因 P C R 产物 在 同
4 00 bp
3 0 0 bp 200bp
1 l ／ 1／ 1／ 2 4 8
M 13
：
～
1
～
1 ／ 1／ 1／ 2 4 8
8
、
1
l ／ 1／ l ／ 2 4 8
4
l
B PCR
1／ 1／ 1／ 2 4 8
标 准 对 照 ；1
16
：s e x o n
～
4
：P
ERVp PCR
产 物 ；5
1／ 2
、
：E n v
A PCR
产 物 ；9
12
：E n v
产物：
l~
PCR
产物；1
、
1／ 4 E
1／ 8
为 稀释 倍 数
E
n v
图
M
：D
～
1
西 藏小型 猪 P E R V p
～
、
n v c
A
、
B
、
s e x o n
la
的
P CR
c t；9
产 物 的 电泳 图 谱
～
NA 16
r e
m a r
k e r ；1
6
：P
E R V p P C R pro du
，
t；5
～
8
：E n v n
A P C R pr o du fa
c
12
：E n v
B P C R pr o du
c t
；
13
：s e x o n
l a P C R p r o d u c t ；1
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1／ 2
，
4 1／
，
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１２ ６
实验动物 与 比较医学 Ｌｂ ｒｔｒ Ａ ｉ ｌ ｎ Ｃ ｍｐ ｒｔ ｅ ｄｃ ｅ ａｏａｏｙ ｎｍａａ ｄ ｏ ａａｖ ｉｉ ｉ Ｍｅ ｎ
Ｊｎ２ ０ ，８３ ｕ ．０８２ （）
五 指 山猪 ｗｕ Ｚ ｉ ｈ １ ｎ。ｉ ｈ． ｉ ｍｉｉ ｇ ｓｎ ｐ
１ ５
２ ． － ３８ ９３ ４ ． ８－ －１ ３
１．６＿ ５３ ００ ４ ． － ４
２ ． － ． ０７ ４ ８３ ２－ ６
西藏 小 型猪 Ｔｂ ｔ ｎ－ｉ ｉｅｍｉｉ ｇ ｐ
巴 马 小 型猪 Ｂ ｍａ ｎ－ｉ ａ ｍｉ ｐｇ ｉ
１ ５
１ ５
２ ．１ １．１ ８７ ± ４１
２ ． ４４ ７１ ｉ ． ２ －１ ３
１ ．３４ ５７ ０２ － ．１
１ ．１± ６２ ０５ ． ３
１． ８３ ５± ８ ０ ． ５
１． ７６ ０± ８６ ．５
一
块凝胶 上 进行 荧光 强度 测 定， 使背景 的影 响保持 一
除 Ｐ ＲＶ 的 可 能威 胁 。 而 且 我们 知道 ，人 体 内 自 Ｅ 然 存 在 的抗 ．ａ抗 体 能 阻止各 种 表面 表达 ｃ ｇ ｌ ｇｌ ｃ ａ抗 － 原 的微 小有 机 体（ Ｐ ＲＶ） 如 Ｅ 的入 侵 。来 自转基 因猪 的 Ｐ ＲＶ没 有 ．ａ 抗 原 表达 ， Ｅ ｇｌ 理论 上讲 比来 自非转 基 因猪 的 Ｐ Ｖ 更 具 有病 原性 【。 ＥＲ 引 本 文 首 次报 道 了
利 用 半定 量Ｐ Ｒ方法 对西藏 小 Ｃ
致 ， 加 了数 据 的可 靠性 。凝胶 板 不 宜 过 大， 增 否则 发 生偏 光 ；特 别是 在 凝胶 的 ４周， 时较 弱 的带 很难 有 分 辨清 楚， 实验 误差 增大 。图 １ 示 了不 同稀 释倍 数 表 情况 下 西藏 小型 猪 ４个基 因 的凝 胶 电 泳结 果 。 ２２ 西 藏 小型猪 Ｐ ＲＶ基 因拷 贝数 分析 结 果 ． Ｅ 西藏 小 型猪及 其 它ｚｌ ４ 型猪 Ｐ ＲＶ基 因拷 贝 ￣， Ｅ 数 分析 结 果见 表 １ 由测 得 的每 个 个 体 的数 据 可 以 。 看 出膜 蛋 白 Ｂ 的拷 贝数 低 于 Ｐ ＥＲＶＰ 的拷 贝 数 。 Ｐ Ｒ ｐ 映 内源病 毒基 因 的拷 贝数， 病 毒基 因依 ＥＶ反 内源 据膜 蛋 白的类 型 又 划分 为 Ａ、Ｂ 和 ｃ 型 ，ｃ 型 内 源 病 毒 又 与 性 别有 关 。在 本 实 验 中没 有 考 虑 性 别， 故只 检测 了膜 蛋 白 Ａ和 Ｂ 两 种 膜 蛋 白类 型 ；因 此 Ｐ Ｒ ｐ应 大于 或等 于膜 蛋 白Ａ和 Ｂ的两者 之和 ， ＥＶ 膜 蛋 白 Ｂ 的拷 贝数 不应 超过 Ｐ ＲＶ Ｅ ｐ的拷 贝数 。 在所 测 得 的几 种 中 国小型 猪 中 ，都 有膜 蛋 白Ａ
型猪 内源病毒基因拷贝数 的研究，并 比较 了不同品 种 小 型 猪 间 内源 病 毒 基 因拷 贝数 的 差 异 。半定 量 Ｐ Ｒ方法 主 要利 用 Ｐ Ｒ反应 的灵 敏性和 特异 性等特 Ｃ Ｃ 点 ，通过 在线 性 增长 期 内 目的片 段 的扩增 强度 与单
拷 贝基 因的 强度 相 比较 ，判 定 目的基 因 的拷 贝数 。 由于模 板Ｄ 量和扩 增 片 段 的荧光 强度测 定受 到所 ＮＡ
用 方 法 精 度 的限 制 ，被 称 为 半 定 量 Ｐ Ｒ。连 正 兴 Ｃ 等［ ３ 】 模化 检 测 之前 ， 以制备猪 基 因组 Ｂ 在规 ＡＣ文库 的长 白猪 基 因组 ＤＮＡ为模 板 ，检测 了内源 病 毒基 因拷 贝数 ，结 果 与用 该 ＢＡＣ库 筛选 并测 序 的 内源 病 毒 基 因拷 贝数 相 同 ， 肯 定 了此 方 法 的可 靠 性 。
和 膜蛋 白Ｂ的重 叠现 象， 些 个体 膜 蛋 白Ａ和 Ｂ之 即某
和大 于 Ｐ Ｖ 基 因 的拷 贝数 ，且 在 多个 位 点 发 生 。 ＥＲ 五指 山猪 的所 有 个体 都 发生 了重叠 现 象 。
内源 病 毒序 列 以有 丝 分裂激 活 的方式 感染 人的
细 胞 系 ，造 成 了异种 器 官 移 植恐 惧…。据估 计猪 的 内源 病 毒序 列 具 有 ５ ０个左 右 的拷 贝 ，同时 也造 成 了通 过供 体选 择 消 除 内源 病 毒序 列 的 困难 ［。根据 ５ Ｊ 膜 蛋 白 的类 型 不 同 ，猪 的 内源 病 毒分 为 ３种类 型： Ｐ Ｒ Ａ、Ｐ Ｒ Ｂ和 Ｐ ＲＶ Ｃ Ｅ Ｖ． Ｅ Ｖ． Ｅ ． 。在 各个 不 同的猪种 和 同
一个 体 的 不 同组 织 细胞 中 ，Ｐ ＲＶ 以 Ａ、Ｂ两 Ｅ
种 亚 型 为主 ，Ｃ 亚 型 首先 发 现 于 猪 的 一种 淋 巴瘤
３ 讨论
自２０ ００年 Ｌ ｃ 【证 实，Ｐ ＲＶ可 以感 染接 受 ｕ等 １ ｊ Ｅ
猪胰 岛移 植 的 Ｓ Ｉ 小 鼠后 ，跨种 间感 染及 异 种移 ＣＤ
植 的安 全性越 来越 受 到重视 。通过 将 动物培 育 成无 特殊病 原 菌（Ｐ ） Ｓ Ｆ动物 或无 菌动物 可使 大 多数 的外源 性病 毒和 细 菌得 以消 除， 是 ， Ｅ Ｖ 是存 在猪 体 内 但 ＰＲ
的一种 内源 性病 毒，通 过猪 的 Ｓ Ｆ化无 法 消除 。 Ｐ
中 。Ｂ ｓｈ等［发现 ， Ｈ 的小型 猪 中有 极少 数个体 ｏｃ ６ ］ ＮＩ
表 达 Ｃ亚 型 的 Ｐ Ｒ Ｅ Ｖ，在 其他 猪种 中还 未 见有 Ｃ亚
型 Ｐ Ｒ 的表 达 。 目前 有 人认 为 Ｐ Ｒ Ｃ与 性别有 Ｅ Ｖ Ｅ Ｖ。 关 ，不 同 的类 型 与 宿 主 特 异 性 有 关【 。
２０ 英 国 罗斯 林研 究 中心 的子 公 司 Ｐ Ｌ医 ０４年 Ｐ 疗 公 司培 育 出 了５ Ｋ转基 因小猪 ， 它们 的一个 能引 发
本 文 四种 小 型猪 均 为我 国培 育 的小 型猪 在所 测 的 ３ 指标 的拷 贝数之 间无 统计 学差 异（＞ ５。 个 Ｐ ０ｏ ）
这可 能是 与这 几种 小 型猪 在 实验 动物 化进 程 中均有
人体排异反应的基因被关闭， 从而使异种器官移植技 术 向前 迈 出重大 的一 步 。但 Ｐ ＲＶ与猪 共 生 了几 百 Ｅ
万 年 ， 已变 成 猪 基 因的 一 部 分， 基 因猪 仍 不 能 消 转
不 同 程 度 的近 交 有 关 。
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Ｊｎ２ ０ ，８３ ｕ ．０ ８２（）
实验动物与 比较 医学 Ｌ ｂ ｒｔｒＡｎｍａａ ｄ ｍｐ ｒｔ ｅＭｅ ｉｎ ａ ｏａ ｙ ｉ ｌｎ ｏ Ｃｏ ａａｖ ｄ ｉｅ ｉ ｃ
１３ ６
由于大 片段 ５ ’调控 区或 结 构基 因区 的缺 失造 成 部分拷 贝失去 了转 录活 性和 功 能 ， 因此并 不是 所 有 的拷 贝都 具 有 感 染 活性 ，然 而 ， 一个 内源 病 毒
基 因的读 框可 以同其 他读 框 互 补或重 组产 生 具有 生
［ 考 文 献】 参
… ｖ ｎｄｒ ａ ａ ＪＬ ｃ ｅ ， ｉ ｅ Ｃ ｅ Ｉｆｃ ｏ ｙ ａ ｅ Ｌ ｍ Ｌ ， ｏｋ ｙＣ Ｇｆ ｔ ｆ ｈＢ ， ｔ ｎｅｔ ｎｂ ｉ
ｐ ｒ ｉ ｅｅ ｄ ｇ ｎ ｕ ｔｏ ｉｕ ｆ ｒ ｓｅ ｘ ｎ ｌ ｓ ｌｎ ａｉｎ ｏ ｃ ｎ ｏ ｅ ｏ ｓｒ ｒ ｖｒ ｓａ ｅ ｉｌｔ ｅ ｏｍｎ ｐａ ｔｔ ｎ ｅ ｔ ｏ
物 活性 的病 毒颗粒 ， 因此 可 以通 过选 择 性育 种 降低
内源病 毒 的拷 贝数 【，近 交 猪 种 的 内源病 毒基 因拷 ５ 】
ｎ Ｓ Ｉ ｃ
【】 ｕｅ ２ ０ ， ０ ：０９ ． ｉ Ｃ Ｄｍｉｅ Ｊ． ｔｒ， ００ ４ ７ ９ —４ Ｎａ 【】Ｆａ ｅ ， ｌ ｅ Ｅ Ｄｅｒ ｒ ｄ ｇｎ ｕ ｔ ｖ ｕ － ２ ｉ Ｍｏｌ ｓ ， ｇ６Ｍ．ｉ ｅ ｏｅ ｏ ｓｅ ｏ ｉ ｓ ｎ ＡＥ ｎ Ｔ ｎ ｇ ｒｒ ｒ ａ ｈｅｔｏｃｎｃｌ ｅ ｏｒ ｓｌ ｔｔ ｎ ［ＡＰ Ｓ２０ ， ０ ｒａｔ ｌ ｉａｘ ｎ ｔ ｎｐａ ａ ｏ ？Ｊ ＭＩ， ０ １８ ｔ ｉ ａ ｎ ｉ ］ ０
（）２ １２ ０ ４： ４ —５ ． 【】 连正兴， Ｒ ｇ ｌ ａ ａｄ 李 宁， 利用半 定量 Ｐ Ｒ方 ３ Ｃ． ｏ ｅ－ ｉｒ ， Ｇ ｌ 等． Ｃ
贝数 低 也证 明 了这 一 点 。更 有趣 的是本 实验 中发 现
了膜蛋 白Ａ与膜 蛋 白Ｂ具有 重 叠现 象 。 ｏ ｅ Ｇ ｉａｄ Ｒ ｇ ｌ ａｌｒ ｌ
利 用猪 基 因 组 Ｂ ＡＣ文 库 筛 选 内源 病 毒序 列 时 ，共
法分析中国地 方猪种 内源病毒序 列拷贝数的多态性［ Ｊ ］畜 牧 兽医学报， ０ ２， ３６： ２ —２ ． ２０ ３ （） ５ １５ ４ 【］Ｗｉｏ Ｃ ， ｎ ＳＭｕｌ Ｊ ａ Ｔ ｐ Ｃｒ ｒｖ ｕ ｒｌ ｓｄ ４ ｌ ｎ Ａ Ｗｏ ｇ ， ｌｒ， ／ ｙ ｅ ｅｏ ｉ ｓｅ ａｅ ｓ ｅ ． ｔ ｒ ｅ
ｆｏ ｐ ｒ ｉ ｅ ｐ ｍ ａ ｙ ｐ ｒｐ ｅ ｌ ｏ ｎ ｎ ｃｅ ｅｌ ｒ ｍ ｏ ｃ ｎ ｒ ｉ ｒ ｅ ｉ ｈ ｍｌ ｏ ｄ ｍｏ ｏ ｕ ｌａ ｃ ｌ ｂ ｒ ｓ
获得 了 ６ 阳性 克 隆含 有 Ｐ Ｒ ２个 Ｅ Ｖｐ序 列 ，５ ％ 为膜 ５
蛋 白 Ｂ、２ ％ 为膜 蛋 白 Ａ、 １ ％ 为 两种 膜 蛋 白类 ９ ０ 型 均有 的克 隆 ，即膜 蛋 白 Ａ和 膜 蛋 白 Ｂ 相重 叠【， ８ 】 而所 测 得 的几 种 中 国小型 猪 的两 种膜 蛋 白的重叠 率 较 高 ，形成此 种现 象 的原 因可 能是基 因序 列 区 的部
ｎ ｅｔｈ ｍａ ｓＪ． ｒ ，９ ８ ７（）３ ８ －０ ７ ｉｆｃ ｕ ｎｃｌ ［］Ｊ ｉ ｌ１９ ， ２４： ０２３ ８ ． ｓ ｅ Ｖ ｏ
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（） ２２２ ６ ３： ８ —８ ．
分 删 除 、突 变 或 引 物 区 的重 叠 等 原 因造 成 。 本研究 结果提 示 了通 过大 规模 的筛 选 或利用 选 种 手段培 育无 内源 病 毒序 列 、适 用于 异种 器 官移 植 新猪 种 的可 能性 。如 能对 我 国优 良地 方猪 种大
规 模
检测之后 进行合 理开 发利用， 或可 对人异 种器 官移植 中供 体 器 官不 足 的危 机 提 供 一 个 良好 的解 决 途 径 。
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本 实验 仅对 几种 小型 猪 的外 周 血 白细胞 Ｐ Ｒ Ｅ Ｖ
进行 了拷 贝数分 析 ， 由于 Ｐ ＲＶ具有 不 同 的细胞 嗜 Ｅ 性，因此 ，有必 要进 一步 对 几 种 小 型猪 体 内各 组 织 和 器 官进 行 相应 的 Ｐ ＲＶ 及 其 亚型 分 析 。 Ｅ
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